Методы определения общего холестерина в крови

Методы определения общего холестерина в крови

Холестерин это один из жиров, соединение вырабатывается печенью и имеет очень важное значение для правильного функционирования всех органов и организма в целом.

Каждая клетка нашего тела содержит в наружной мембране часть холестерина.

У животных это соединение представлено как воскообразный стероид, который транспортируется кровью. Холестерин относится к спиртам. По химической номенклатуре называется холестерол. Использовать можно оба эти названия.

Это вещество выполняет ряд функций:

  • покрывает нервные волокна;
  • участвует в процессе метаболизма жирорастворимых витаминов;
  • принимает участие в выработке витамина Д в кожном покрове под воздействием солнечного света;
  • активный компонент в процессе синтеза половых гормонов;
  • участвует в производстве кортизола, альдостерона.

Для человеческого организма, нормальный уровень выработки холестерина имеет показатель от 3,5 ммоль на литр до 7,7 ммоль на литр.

Хотя, если прислушиваться к рекомендациям специалистов из Великобритании, то показатель выше 6 моль на литр считается уже завышенным. При таком показателе увеличивается риск возникновения атеросклеротической патологии.

Практически все врачи классифицируют показатели — миллиграмм/децилитр или миллимоль/литр, поэтому общепринятые значения могут отличаться:

  1. в норме содержание меньше 200 мг/дл;
  2. выше нормы — до 239 мг/дл;
  3. высокий показатель — 240 мг/дл;
  4. подходящий уровень — от 5 до 6,3 ммоль/л;
  5. незначительно завышен — от 6,4 ммоль/л;
  6. допустимый, но высокий — от 6,5 до 7,7 ммоль/л;
  7. завышенный уровень — выше 7,9 ммоль/л.

Рекомендованный уровень холестерина в сыворотке крови человека, должен составлять плотность 5 ммоль на литр.

Методы определения содержания холестерина

Современная медицина на сегодняшний день разработала много методов определения холестерина в крови.

Для одной из диагностических проверок, достаточно всего лишь обратиться ближайшую больницу.

Если присутствует в организме высокий уровень, это может привести к плохим последствиям.

В таком случае заниматься самолечением категорически запрещено.

Методики и принцип определения:

  • Гравиметрический;
  • Титриметрический;
  • Флуориметреческий метод способен измерять холестерин при малейшем объеме сыворотки крови;
  • Газохроматографический и хроматографический;
  • Колориметрический метод;
  • Тонкослойная хроматография;
  • Газожидкостная хроматография;
  • Полярографический метод способен точно определить общий холестерин в сыворотке крови, а также свободный;
  • Ферментативный метод. Протекает по определенному алгоритму.
  • Спектрофотометрический — зависит от содержания холестерола.

Существует также поляриметрический метод. Этот метод основан на проведении нескольких цветных реакций.

Первая реакция это Биоля-Крофта. Для неё используются уксусную кислоту и серную, при наличии холестерина раствор приобретает красный цвет.

Вторая реакция — это Ригли. Реакция заключается во взаимодействии холестерина с раствором, содержащим метанол и серную кислоту.

Третья реакция – Чугаева, основана на взаимодействии холестерина с ацетилхлоридом и хлористым цинком.

При наличии холестерина раствор приобретает красную окраску. Следующая реакция Либермана-Бурхарда. В ходе реакции происходит окисление холестерина в кислой среде, не содержащей воды.

В результате образуются сопряженные двойные связи. В результате появляется комплексное соединение изумрудно-зеленого цвета. Эта реакция отличается от остальных тем, что не имеет постоянного окрашивания. В медлитературе встречается разное соотношение компонентов реакции.

Последний Метод это реакция Калиани-Златкмса-Зака.

Заболевания при высоком уровне холестерина в крови

Укажите Ваш сахар или выберите пол для получения рекомендацийИдет поискНе найденоИдет поискНе найденоИдет поискНе найдено

Высокий уровень холестерина может привести к различным заболеваниям.

Врачи рекомендуют сдавать общий анализ крови на концентрацию холестерина каждый год.

Такой подход позволяет выявить большое количество патологий на ранних стадиях развития.

При наличии отклонений от нормы в содержании ЛПВП и ЛПНП в организме возможно возникновение ряда заболеваний, таких как:

  1. стенокардия;
  2. инсульт;
  3. инфаркт миокарда;
  4. расстройства в работе сосудистой системы;
  5. атеросклероз и другие патологии.

Стенокардия — это болезнь, которая характеризуется острой болью, дискомфортными ощущениями в грудной клетке. Данные симптомы спровоцированы тем сердечная мышца не получает необходимое количество кислорода и питательных веществ для нормальной работы.

Микроинсульт, инсульт. Возникает вследствие образования в крови сгустка, способного блокировать кровеносный сосуд, расположенный в головном мозге.

В результате происходит нарушение кровообращения, приводящее к постепенному отмиранию клеток определенного участка головного мозга.

Инфаркт миокарда это патология, формирующаяся при блокировке доступа крови к клеткам сердечной мышцы, в результате чего возникает кислородное голодание. Чаще всего это спровоцировано образованием тромба, расположенного в просвете коронарных артерий. Это может привести к частичной гибели сердечной мышцы.

Атеросклероз. Данная патология бывает нескольких типов.

Выделяют атеросклероз нижних конечностей, сосудов сердца, печени, почек, желудка и других органов. Возникает в результате образования атеросклеротических бляшек, которые расположены в сосудах кровеносной системы. Они затрудняют или полностью перекрывают кровоток, что приводит к нарушению кровообращения. Прогрессирование заболевания может спровоцировать наступление летального исхода.

Причины и симптомы повышенного холестерина

Существует множеств разных симптомов, по которым можно самостоятельно выявить наличие повышенного холестерина в крови.

Опытный специалист определяет это без исследования. Легче всего определить наличие повышенного уровня по присутствию в организме характерных нарушений в работе.

Для повышенного холестерина характерно наличие у больного следующих симптомов:

  • Появление желтых пятен на кожных покровах, особенно вокруг глаз. Данный симптом имеет медицинское название — ксантома. Чаще всего это может передаваться наследственным путем.
  • Появление болевых ощущений возникающих в конечностях при оказании на организм физической нагрузки. Симптом развивается в результате сужения артериальных сосудов снабжающих кровью конечности.
  • Наличие стенокардии, возникающей в результате сужения коронарных артерии сердца.
  • Образование мини инсульта, в результате формирования сгустков крови и разрыва сосуда.
  • Развитие сердечной недостаточности, в результате недостатка в кислороде и питательных веществ.

Все причины, по которым может быть повышен холестерин в крови, разделяют на два вида изменяемые и неизменяемые.

Основным фактором, оказывающим влияние на повышение уровня холестерина в крови, является неправильное питание и неправильный образ жизни. Помимо этого на этот показатель может оказывать влияние состояние окружающей среды.

К неизменяемым факторам относятся возраст и генетическая предрасположенность в возникновении повышенной концентрации холестерина.

Основными причинами повышения холестерина являются:

  1. Вредные привычки. Курение является одной из основных причин возникновения патологии. Потребление алкогольных напитков может привести к алкогольной зависимости, как правило, все алкоголики имеют высокий уровень ЛПНП, а уровень ЛПВП — понижен.
  2. Лишний вес. Группа людей, которые страдают от лишних килограммов или ожирения обладают высоким уровнем ЛПНП. Это наблюдается чаще, чем у людей с нормальным весом.
  3. Неподвижный образ жизни. Для сохранения нормального уровня холестерина, нужно ежедневно делать утреннюю зарядку на протяжении 20 минут. По возможности рекомендуется ходить в спортзал на занятия с тренером, заниматься аквааэробикой, ездить на велосипеде минимум раз в неделю. У кого нет такой возможности, могут заниматься быстрой ходьбой ежедневно на протяжении 1 часа. Не рекомендуется вести малоподвижный образ жизни.

Помимо этого к основным причинам относится неправильное питание. Некоторые продукты содержат повышенное количество холестерина. Например, яйца, почки. Чтобы избежать повышенного показателя, следует придерживаться правильного питания. Рекомендуется рассчитывать количество калорий на каждый день с учетом энергетической и пищевой ценности продуктов.

Факты о холестерине рассмотрены в видео в этой статье.

Укажите Ваш сахар или выберите пол для получения рекомендацийИдет поискНе найденоИдет поискНе найденоИдет поискНе найдено

Источник: https://diabetik.guru/analyzes/opredelenie-holesterina.html

Общий холестерин и его фракции

Холестерин — одноатомный спирт, в молекуле которого имеется ядро циклопентанпергидрофенатрена.

Он является компонентом клеточных мембран, предшественником при синтезе желчных кислот, стероидных гормонов (глюкокортикоидов, альдостерона, половых гормонов), витамина D, обнаруживается во всех тканях и жидкостях организма как в свободном состоянии, так и в виде эфиров с жирными кислотами, преимущественно с линолевой (около 10% всего холестерина). Синтез холестерина происходит во всех клетках организма. Основными транспортными формами в крови являются α‑, β‑ и преβ‑липопротеины (или, соответственно, липопротеины высокой, низкой и очень низкой плотности). В плазме крови холестерин находится главным образом в форме сложных эфиров (60‑70%). Эфиры образуются либо в клетках в реакции катализируемой ацил-КоA-холестерин-ацил­трансферазой, использующей в качестве субстрата ацил‑КоA, либо в плазме в результате работы фермента лецитин-холестерин-ацил­трансферазы, осуществляющей перенос жирной кислоты со второго атома углерода фосфатидилхолина на гидроксильную группу холестерина. В плазме крови главными источниками холестерина и фосфатидилхолина для реакции служат липопротеины высокой и низкой плотности, этим путем образуется большая часть эфиров холестерина плазмы.

Для определения содержания холестерина в крови используют следующие методы:

  1. Титрометрические.
  2. Гравиметрические.
  3. Нефелометрические.
  4. Тонкослойная и газожидкостная хроматография.
  5. Полярографические методы, позволяют определять общий и свободный холестерин в присутствии ферментов холестеролоксидаз и холестеролэстераз.
  6. Флюориметрия по реакции с о‑фталевым альдегидом и другими реактивами.
  7. Ферментативные методы — определение протекает в одной пробирке, но в несколько этапов: ферментативный гидролиз эфиров холестерина, окисление холестерина кислородом воздуха с образованием холест‑4‑ен‑3‑ола и перекиси водорода. В качестве ферментов применяются холестеролоксидаза, холестеролэстераза, пероксидаза, каталаза. Ход реакции можно регистрировать:
  • спектрофотометрически по накоплению холестенола.
  • по убыли кислорода в среде.
  • по изменению окраски раствора, в качестве хромогенов — индикаторов протекания реакций — используются 4‑гидроксибензоат, 4‑амино­феназон, 4‑аминоантипирин.

Все эти методы весьма специфичны и хорошо воспроизводимы.

  1. Колориметрические методы, в основе которых лежат следующие цветные реакции:
  • реакция Биоля‑Крофта с использованием персульфата калия, уксусной и серной кислоты и с появлением красного окрашивания.
  • реакция Ригли, базирующаяся на взаимодействии холестерина с реактивом, в составе которого имеются метанол и серная кислота.
  • реакция Чугаева, в которой появляется красное окрашивание после реакции холестерина с ацетилхлоридом и хлористым цинком.
  • реакция Либермана‑Бурхарда, при которой холестерин окисляется в сильно кислой абсолютно безводной среде с образованием сопряженных двойных связей. В результате образуется соединение холестагексаена с концентрированной серной кислотой изумрудно‑зеленого цвета с максимумом абсорбции при 410 и 610 нм. Особенностью этой реакции является отсутствие стабильности окрашивания. В литературе можно встретить разное соотношение ингредиентов в реактиве Либерман-Бурхарда: чем выше содержание уксусного ангидрида, тем с большей скоростью протекает реакция. Протеканию реакции способствуют сульфосалициловая, паратолуенсульфоновая, диметилбензол‑сульфоновая кислоты. С эфирами холестерина реакция идет медленнее, чем со свободным холестерином, скорость возрастает при повышении температуры, свет оказывает разрушающее воздействие на продукты реакции. Все методы, основанные на реакции Либерман-Бурхарда, подразделяются на прямые и непрямые:
Читайте также:  Первые признаки повышения сахара в крови: причины и симптомы
◊ к непрямым относятся методы Энгельгарда‑Смирновой, Раппопорта‑Энгельберга, Абеля и заключаются в предварительной экстракции холестерина из сыворотки с последующим определением его концентрации. Из этой группы методов наиболее известен метод Абеля с экстракцией свободного и этерифицированного холестерина изопропанолом или петролейным эфиром, гидролизом эфиров холестерина и последующей реакцией Либерман-Бурхарда. Методы этой группы более воспроизводимы и специфичны;
◊ в прямых методах (Илька, Мрскоса‑Товарека, Златкис‑Зака) холестерин предварительно не экстрагируется, а цветная реакция осуществляется непосредственно с сывороткой. Выявлено, что определение концентрации холестерина по Ильку при сравнении с методом Абеля дает более высокие (по разным авторам на 6%, на 10‑15%) значения, что необходимо учитывать при типировании гиперлипопротеинемий.
  • реакция Калиани‑Златкиса‑Зака, заключающаяся в появлении красно‑фиолетового окрашивания раствора при окислении холестерина хлорным железом в уксусной и концентрированной серной кислотах. Эта реакция в 4‑5 раз чувствительнее, чем реакция Либерман‑Бурхарда, но менее специфична.

Унифицированными методами являются колориметрические методы Илька и Калиани-Златкис-Зака.

Определение содержания общего холестерина
в сыворотке крови методом Илька

Принцип

Основан на реакции Либерман‑Бурхарда: в сильно кислой среде в присутствии уксусного ангидрида происходит дегидратация холестерина с образованием окрашенного в зеленовато‑синий цвет бисхолестадиенилмоносульфоновой кислоты.

Нормальные величины

Сыворотка (указанный метод)  0 ‑ 1 год 1.81‑4.53 ммоль/л
до 20 лет

Источник: http://biokhimija.ru/lipidny-obmen/cholesterin

Анализ крови на холестерин — как правильно подготовиться

Даже люди, далёкие от медицины, наслышаны о таком заболевании, как атеросклероз. Оно развивается у каждого пятого жителя планеты и связано с нарушениями жирового обмена организма.

Атеросклероз имеет множество клинических проявлений: головную боль и головокружение, нарушение процессов запоминания и концентрации внимания, зябкость и онемение конечностей, периодические боли в сердце и др.

Несмотря на это, симптомы заболевания часто игнорируются пациентами, и нарушения липидного обмена диагностируются только после сдачи анализа крови на холестерин.

Рассмотрим, что может показать биохимическое исследование, как правильно сдать кровь на фракции, и на что нужно обратить внимание при расшифровке анализа.

Холестерин и его фракции: биологическая роль в организме

Холестерин (холестерол) по своей химической структуре является жирным спитом. Большая его часть (70-80%) синтезируется в клетках печени и носит название эндогенного, небольшое количество (20-30%) поступает вместе с пищей.

Биологическая роль этого вещества в организме огромна:

  • входит в состав биоплазматических мембран клеток, придавая им жесткость и упругость, является их стабилизатором;
  • регулирует проницаемость клеточных стенок;
  • участвует в синтезе стероидных гормонов, вырабатываемых надпочечниками;
  • служит основой для образования желчных кислот – активных участников пищеварительного процесса;
  • выстилает нервные волокна для их защиты и лучшей проводимости;
  • защищает клетки крови от действия повреждающих веществ и гемолитической ядов.

Так как этот жирный спирт нерастворим в воде, по кровеносному руслу он перемещается в составе специальных белков-переносчиков – аполипопротеинов. В зависимости от плотности и средства к холестерину выделяют несколько типов липопротеинов:

  1. Хиломикрон – самая низкомолекулярная фракция, содержащая до 85% триглицеридов и небольшого количества холестерина. Эти крупные жировые скопления с трудом продвигаются по сосудам и с легкостью оседают на их внутренней стенке.
  2. ЛПОНП – липопротеиды очень низкой плотности – наряду с хиломикронами относятся к триглицерид-богатой фракции жиров в организме.
  3. ЛПНП – липопротеиды низкой плотности – наиболее атерогенный класс жиров, образующихся из ЛПОНП в результате липолиза. Часто называется «плохим» холестерином из-за способности откладываться на внутренней стенке сосудов и образовывать атеросклеротические бляшки.
  4. ЛПВП – липопротеиды высокой плотности – наиболее мелкие жировые частицы, в которых содержание белка намного превышает концентрацию холестерина. Из-за антиатерогенных свойств и способности очищать сосуды от бляшек ЛПВП получил название «хорошего» холестерина.

Таким образом, ЛПОНП и ЛПНП обеспечивают транспорт холестерина из печени на периферию. Именно повышение их концентрации приводит к отложению холестерина на стенках сосудов и образованию атеросклеротических бляшек. ЛПВП в свою очередь переносит жировые клетки в печень для дальнейшей утилизации. При атеросклерозе наблюдается снижение этой фракции.

Подготовка к лабораторному исследованию крови

Как правильно сдать анализ крови на холестерин, чтобы он был максимально достоверен? Конечно, во многом результат зависит от качества техники, используемой в лаборатории. Но и состояние пациента может повлиять на итоги обследования. Специальная подготовка не проводится, однако врачи отмечают необходимость выполнения следующих рекомендаций:

  1. Сдавайте анализ утром натощак: с 8 до 10 часов все биохимические процессы в организме протекают более активно.
  2. Не принимайте пищу в течение 10-12 часов перед обследованием: важно, чтобы последний прием пищи накануне вечером был не позднее 20 часов. Оптимально, если ужин придется на 18-19 часов.
  3. Если утром в день обследования хочется пить, разрешена только простая вода (без газа и добавок).
  4. Питайтесь как обычно на протяжении двух недель перед сдачей крови: нет нужды соблюдать определенную диету, так как результат обследования будет недостоверным.
  5. Не употребляйте алкоголь как минимум за сутки до похода в лабораторию.
  6. Не курите по крайней мере за 60 минут до анализа.
  7. Желательно исключить изнуряющие физические нагрузки и психоэмоциональное переживания за сутки до исследования.
  8. Если в поликлинику вы шли быстрым шагом, или вам пришлось подниматься по лестнице, перед забором крови рекомендуется присесть на 10-15 минут и успокоиться.
  9. Если в этот день у вас также запланированы другие диагностические мероприятия и манипуляции (рентген-обследование, УЗИ, посещение врача и др.), лучше провести их после сдачи крови на анализ.
  10. Обязательно предупредите своего лечащего врача, если вам приходится постоянно принимать какие-либо медикаменты. Специалист расскажет, как подготовиться к анализу в этом случае, и будет учитывать действие препаратов при интерпретации результатов обследования.

Биохимический анализ крови: основные показатели здоровья

Биохимический анализ – доступный метод комплексной диагностики проблем человеческого организма, во время которого определяются основные показатели белкового, жирового и углеводного обменов, а также оценка функционирования внутренних органов.

Для исследования у человека берется 2-5 мл венозной крови. Затем биоматериал маркируется соответствующим образом и отправляется в лабораторию для анализа.

Определение холестерина

В ходе биохимического анализа крови определяется только концентрация общего холестерина – суммарное отражение всех его фракций. В норме его уровень колеблется в зависимости от возраста и пола человека, но в среднем составляет 3,2-5,6 ммоль/л. Повышение уровня холестерина в организме – серьезная угроза, провоцирующая развитие атеросклероза и других обменных нарушений.

Общий белок крови

Общий белок – еще один суммарный показатель, отражающий состояние белкового обмена. В ходе обследования подсчитывается общее число белков в составе всех фракций.  Нормальные значения анализа – 66-83 г/л.

При снижении общего белка в организме можно заподозрить серьезные нарушения в работе печени и почек. Повышение его концентрации часто свидетельствует о воспалении. Уровень белка также может влиять на развитие атеросклероза, так как это вещество участвует в транспорте молекул холестерина по сосудистому руслу.

Мочевина и креатинин

Эти показатели рассматриваются совместно и отражают работу почек в организме. Норма мочевины – 2,5-8,3 ммоль/л, креатинина – 44-106 мкмоль/л.

Однако их повышение наблюдается не только при пиелонефрите, гломерулонефрите или хронической почечной недостаточности, но и при нарушенном липидном обмене.

Увеличение концентрации креатинина и мочевины при отсутствии заболеваний почек могут говорить об атеросклерозе.

Способы измерения в сыворотке крови

Помимо биохимического анализа существует несколько способов измерения уровня холестерина в крови. Рассмотрим их особенности и сферу применения.

Портативный биохимический анализатор – экспресс-метод диагностики

Определение концентрации холестерина с помощью портативного биохимического анализатора – самый быстрый и удобный метод диагностики нарушений липидного обмена.

Анализатор представляет собой небольшой прибор, работающий на батарейках. В комплекте с ним поставляются специальные тест-полоски, которые используются для измерения: холестерина; триглицеридов; глюкозы; молочной кислоты.

Процедура теста очень проста: медицинский работник или пациент прокалывает кончик безымянного пальца ланцетом, и аккуратно подносит к капельке крови кончик тест-полоски, вставленной в прибор. Через 180 секунд уже готов результат, который высвечивается на большом дисплее. Удобно, что прибор сохраняет более 100 предыдущих результатов для контроля течения заболевания.

Преимущества метода: возможность прибора измерять холестерин в домашних условиях; малая инвазивность, для обследования необходима лишь небольшая капля крови; удобство использования; не требуется калибровки реагента; высокая точность измерений.

Недостатки метода: высокая стоимость анализатора; вероятность погрешности при неправильном использовании.

Читайте также:  Топ рецептов для диабетиков на новый год: что можно кушать в удовольствие?

Лабораторные методы определения

На сегодняшний день существует несколько способов определения холестерина в лаборатории. С помощью них можно определить точное содержание холестерина в сыворотке крови. Хотя эти методы диагностики занимают больше времени (как правило, 1-2 суток), по достоверности они превосходят данные, полученные на портативном биохимическом анализаторе.

Способ Златкиса-Зака

Метод Златкиса-Зака позволяет определить концентрацию общего холестерина, как свободного, так и связанного с белками плазмы. В комплект реагентов входит:

  • серная (H2SO4) кислота;
  • уксусная кислота;
  • хлорное железо;
  • фосфатная кислота.

В смесь этих веществ добавляется сыворотка крови. После химической реакции окисления сыворотка приобретает один из оттенков красного – от ярко-морковного до насыщенного бордового. Оценка результатов проводится с помощью специальной фотометрической шкалы. Норма холестерина, определенного, по методу Златкиса-Зака – 3,2-6,4 ммоль/л.

Способ Илька

Это исследование уровня холестерина также основано на взаимодействии сыворотки крови и смеси органических и неорганических кислот:

  • концентрированной серной;
  • ледяной уксусной;
  • уксусного ангидрида.

Реакция Илька считается потенциально опасной из-за высокой концентрации кислот, поэтому может проводиться только в лаборатории химиком или врачом-лаборантом. Норма холестерина, определенного по методу Илька – 4,6 5-6,45 ммоль/л.

Способ определения холестерина с использованием прибора «Новохол»

Данный метод предполагает использование вместо кислот более безопасных веществ:

  • Холестеролэстеразы;
  • Холестеролоксидазы;
  • Пероксидазы;
  • Аминоантипирина.

В ходе последовательных химических реакций, включающих расщепление связей и превращение всего холестерина сыворотки крови в свободный, происходит его взаимодействие с аминоантипирином. Норма вещества зависит от реагентов конкретной лаборатории, а также пола и возраста больного.

Измерение уровня свободного холестерина

Для полной диагностики некоторым пациентам помимо общего назначается определение свободного холестерина. Несмотря на незначительную концентрацию в сыворотке крови, именно эта фракция жирного спирта наиболее атерогенна и становится причиной образования бляшек на внутренней стенке сосудов.

Для проведения анализа специалист экстрагирует весь холестерин из сыворотки крови с помощью этилового спирта. Затем, используя различный набор реагентов (томатин, дигитонин, пиридинсульфат), свободный холестерин переводится в осадок, и определяется его количество. Норма анализа – 1,0 4-2,33 ммоль/л.

Липидограмма – расширенный анализ жирового обмена

Липидограмма – комплексное обследование обмена холестерина в организме, позволяющее одновременно оценить концентрацию всех его фракций, а также предположить о наличии или отсутствии риска развития атеросклероза.

  • Общий холестерин. Исследование проводится по одному из способов, указанных выше. Как сдавать кровь на холестерин, в каждом конкретном случае определяет врач. Этот показатель отражает содержание как свободного, так и связанного с липопротеинами жирного спирта. Увеличение его уровня может свидетельствовать об ишемических заболеваниях сердца, сосудистой церебральной патологии. При снижении уровня холестерина, которое встречается реже, можно предположить недостаточное поступление животных жиров в организме или любые проблемы с печенью.
  • Липопротеины низкой плотности. Их концентрацию определяют путем анализа оседающего содержимого сыворотки крови в результате химической реакции с пиридинсульфатом. Норма анализа — ≤ 3,9 ммоль/л. Превышение этих значений является лабораторным показателем атеросклероза.
  • Липопротеины высокой плотности. Подсчет фракции «хорошего» холестерина обычно производится вычитанием из общего холестерина низкомолекулярных фракций. Его определение необходимо для полной диагностики обменных нарушений в организме. Норма анализа — ≥ 1,42 ммоль/л у женщин и ≥ 1,68 ммоль/л у мужчин. При дислипидемиях наблюдается снижение этих показателей.
  • Триглицериды и ЛПОНП. Существует несколько методов определения триглицеридов и ЛПОНП в сыворотке крови. Самые популярные из них связаны с ферментативными химическими реакциями, основанными на действии: ацетилацетона; хромотроповой кислоты; глицерола. По увеличению триглицеридов и состоящих из них ЛПОНП выше нормы (0,14-1,82 ммоль/л) судят о высоком риске атеросклероза, сердечно-сосудистых и церебральных осложнений.
  • Коэффициент атерогенности. Коэффициент атерогенности – относительная величина, позволяющая судить о рисках развития атеросклеротической болезни у конкретного пациента. В ее основе лежит определение соотношения между «хорошими» и «плохими» фракциями холестерина.КА = (ОХ – ЛПВП) / ЛПВП, где КА – Коэффициент атерогенности, а ОХ – общий холестерин.В норме КА не должен превышать показатель 3.

Таким образом, комплексное исследование липидного обмена позволит оценить состояние организма и предположить причину атеросклероза. Всем здоровым людям старше 40 лет рекомендуется сдавать анализ на общий холестерин по крайней мере 1 раз в 2 года. При атеросклерозе и других патологиях для контроля лечения исследование можно проводить гораздо чаще.

Нашли ошибку в тексте? Выделите ее и нажмите Ctrl+Enter, и мы в ближайшее время все исправим!

Источник: https://holesterinstop.ru/vse-o-xolesterine/analiz-krovi-na-holesterin.html

Определение холестерина в крови

Для определения холестерина в крови по методу Блюра необходимо следующее оснащение рабочего места:

  1. Штативы.
  2. Широкие пробирки.
  3. Мерные центрифужные пробирки.
  4. Микропипетки.
  5. Градуированные пипетки на 2-5 мл.
  6. Капельницы.
  7. Стекляные палочки.
  8. Воронки.
  9. Бюретки.
  10. Водяная баня.
  11. Колориметр Дюбоска или КОЛ-1.
  12. Фильтровальная бумага.
  13. Спирт этиловый 96°.
  14. Эфир.
  15. Холестерин.
  16. Хлороформ.
  17. Уксусный ангидрид.
  18. Концентрированная серная кислота удельного веса 1,84.

Для определения холестерина в крови по методу Мрскоса и Товарека необходимо следующее оснащение рабочего места:

  1. Штативы.
  2. Мерные и простые центрифужные пробирки.
  3. Градуированные пипетки на 1, 2 и 5 мл.
  4. Лед.
  5. Фотоэлектроколориметр.
  6. Сульфосалициловая кислота.
  7. Ледяная уксусная кислота.
  8. Уксусный ангидрид.
  9. Концентрированная серная кислота.

Определение холестерина в крови по методу Блюра

В основу метода положено свойство безводного холестерина в растворе хлороформа давать с уксусным ангидридом и серной кислотой красное окрашивание, переходя еще затем в синие и зеленые тона. О количестве холестерина судят по интенсивности окраски, определяемой колориметрическим способом.

Для этого метода необходимы следующие реактивы:

  1. Реактив Блюра. Готовят смешением 1 части эфира с 3 частями 96° этилового спирта.
  2. Стандартный раствор холестерина: 100 мг сухого, белого цвета холестерина взвешивают в бюксе на аналитических весах, после чего, ополаскивая бюкс хлороформом, навеску холестерина количественно переносят в сухую мерную колбу на 100 мл. Постепенно добавляя хлороформ, полностью растворяют холестерин и доводят количество раствора до метки. В связи с тем что хлороформ летуч, посуду, в которой хранится стандартный раствор холестерина, плотно закрывают пробкой и парафинируют. В 1 мл приготовленного стандартного раствора содержится 1 мг холестерина.
  3. Рабочий раствор холестерина. Готовят из стандартного, разводя его в 10 раз, в день постановки исследования (в мерную колбочку на 25 мл наливают 2,5 мл стандартного раствора холестерина и доводят хлороформом до метки).
  4. Хлороформ.
  5. Уксусный ангидрид.
  6. Концентрированная серная кислота.

Для исследования необходима сыворотка крови.

Техника определения

В штатив устанавливают две градуированные центрифужные пробирки и нумеруют их. В обе пробирки наливают по 3,8 мл реактива Блюра. Микропипеткой в каждую пробирку доливают по 0,2 мл исследуемой сыворотки и тщательно перемешивают их содержимое стеклянной палочкой. Пробирки плотно закрывают резиновыми пробками в амальгаме и оставляют на 24 часа при комнатной температуре.

Через сутки пробирки открывают и содержимое их вновь перемешивают. Если объем жидкости меньше 4 мл (из-за летучести хлороформа), его доводят реактивом Блюра до первоначального объема — 4 мл.

Пробирки можно не закрывать пробками, а сразу же после смешения исследуемой сыворотки с реактивом Блюра погрузить в кипящую водяную баню на 25-35 секунд, размешивая при этом их содержимое стеклянной палочкой.

Пробирки центрифугируют в течение 5 минут при 1000-1500 об/мин. В штатив устанавливают две «сахарные» пробирки и нумеруют их. В каждую из них наливают по 2 мл центрифугата и ставят на водяную баню до полного выпаривания жидкости, в результате чего на дне пробирок образуется пленочка.

Вынув пробирки из водяной бани, их устанавливают в штатив, добавляют для контроля третью сахарную пробирку и в каждую из них разливают реактивы в такой последовательности:

Содержимое пробирок взбалтывают и ставят на 15-20 минут в темноту. За это время возникает зеленое окрашивание, интенсивность которого пропорциональна содержанию холестерина.

Определение концентрации холестерина проводят в колориметре Дюбоска или КОЛ-1. Пример расчета:

Сх=0.2X20X100/(15X0,1)=266,6 мг%

где 0,2 — концентрация холестерина в 2 мл рабочего стандартного раствора в миллиграммах; 20 — толщина слоя рабочего стандарного раствора холестерина; 15 — толщина слоя исследуемого раствора; 100 — коэффициент перевода в миллиграмм-проценты; 0,1 —количество сыворотки, в котором определяют холестерин.

Определение холестерина в крови по методу Мрскоса и Товарека

Сущность метода та же, что и метода Блюра. Для этого метода необходимы следующие реактивы:

  1. 12% раствор сульфосалициловой кислоты: 12 г сульфосалициловой кислоты помещают в мерную колбочку на 100 мл, растворяют в 60-70 мл ледяной уксусной кислоты и доливают ледяной уксусной кислотой до метки.
  2. Ледяная уксусная кислота.
  3. Уксусный ангидрид.
  4. Концентрированная серная кислота.

Для исследования нужна сыворотка крови.

Техника определения

В штатив устанавливают три нумерованные центрифужные пробирки. В первые две (опытные) и в третью (контрольную) разливают реактивы в такой последовательности:

После добавления всех реактивов содержимое пробирок разогревается, поэтому им дают остыть, а затем в каждую из них наливают по 0,4 мл концентрированной сорной кислоты и энергично смешивают их содержимое до тех пор, пока в опытных пробирках не растворится осадок из белков крови. Затем пробирки для охлаждения погружают в воду со льдом на 3-4 минуты и оставляют их на 20 минут в темном месте при комнатной температуре. За это время в них развивается зеленое окрашивание.

Определение концентрации холестерина проводят на фотоэлектроколориметре. С этой целью опытные пробы колориметрируют против контроля в кюветах с расстоянием рабочих граней 10 мм, при красном светофильтре, показания снимают с правого барабана.

Читайте также:  Шприц ручка для инсулина хумулин: что это, цена и отзывы

Из полученных при колориметрировании экстинкций выводят среднее арифметическое, а затем по калибровочной кривой находят результат, который выражают в миллиграмм-процентах холестерина.

Можно также рассчитать результаты, умножив полученную экстинкцию на коэффициент 667 (Й. Тодоров).

Результаты исследования оформляют в бланке анализа. Содержание холестерина в норме равно 160-230 мг%.

Источник: http://ginekolog.my1.ru/publ/klinicheskie_issledovanija/biohim/opredelenie_kholesterina_v_krovi/45-1-0-790

Набор для определения общего холестерина в крови: реагенты

Холестерин может быть одновременно и другом, и врагом человека. Пока его уровень не превышает допустимой нормы, он первый помощник для организма. Но как только показатели станут выше, происходит совершенно обратное.

Чтобы не допустить критической ситуации, следует постоянно контролировать уровень общего холестерина, а также количество ЛПНП в нем.

Как можно провести лабораторное исследование? Поможет в этом набор для определения общего холестерина.

Методы определения

Естественно, на дому, не имея лабораторного оборудования, нельзя методом химического исследования крови установить уровень холестерина. Но можно купить набор реагентов для определения холестерина реактивами. Но есть другие способы определения концентрации этого вещества. На сегодняшний день используются три основных:

  • Новохол;
  • Илька;
  • Златкиса-Зака.

Метод Златкиса-Зака

С помощью этой методики можно достаточно достоверно установить концентрацию общего холестерина в крови, так как в реакцию со свободными молекулами этого вещества вступают реагенты. Используется такой их набор:

  • хлорное железо;
  • уксусная и серная кислоты;
  • фосфатная кислота.

Сначала соединяются три кислоты, потом к ним прибавляется выделенная сыворотка крови, после этого производится окисление с помощью железа. Исследуемая жидкость в ходе реакции будет менять свой цвет от светло-алого до насыщенно-бордового. По этому методу норма холестерина в крови должна оставаться в пределах от 3,2 ммоль/литр до 6,4 ммоль/литр.

Метод Илька

При этом исследовании определения холестерина используются такие реагенты:

  • ледяная уксусная кислота;
  • уксусный ангидрид;
  • концентрат серной кислоты.

Все три вещества нужно соединить в строгих пропорциях, чтобы образовалась очень кислая среда. Затем ее смешивают с сывороткой крови, ее сначала нужно соединить с этиловым спиртом и хлороформом.

Этот метод считается опасным из-за использования сильно концентрированных кислот, поэтому использовать его может только профессиональный химик. По этому методу нормой холестерина является 4,6–6,5 ммоль/литр.

В ходе реакции биосырье окрашивается в различные оттенки зеленого, иногда становится синим или красным – это обусловлено температурой и количеством билирубина в крови.

Метод по набору Новохол

Этот метод самый безопасный из всех перечисленных и его допустимо применять в домашних условиях. Набор реагентов состоит из различных ферментов и аминопирина. Как основное сырье для исследования можно применять плазму крови, желчь, спинномозговую жидкость или слюну.

Сначала в жидкость вводят холестероэстеразу, которая разрушает связи холестерина с молекулами других веществ и преобразует его в свободный. Затем добавляется холестеролоксидаза. В ходе этой реакции холестерин окисляется и преобразуется в холестинон, выделив перекись водорода.

В завершение происходит окисление аминопирина пероксидазой.

На показатели может повлиять наличие остатков гормональных препаратов в крови человека, его возраст, физическая активность. Следует учитывать, что показатели по этим методам не являются абсолютно точными. Поставить диагноз может всегда только врач.

Определение свободного холестерина

Иногда необходимо установить только концентрацию свободного холестерина – главного провокатора атеросклероза и сердечных заболеваний.

Для выполнения этого исследования вначале нужно выделить холестерин из плазмы крови с помощью этилового спирта. Затем вытяжку холестерина с помощью различных реагентов преобразуют в осадок.

Чтобы установить уровень ЛПНП, нужно растворить выделенный осадок с помощью специфических реагентов.

Получить точные показатели вредного или общего холестерина в крови без полноценного биохимического анализа в условиях лаборатории достаточно сложно, так как потребуется специальное оборудование и реагенты, приобрести которые не всегда возможно. Кроме того, сам человек должен разбираться в химии и иметь определенные навыки лаборанта.

К сожалению, уровень холестерина нельзя определить без реагентов, как уровень глюкозы в плазме крови, посредством несложного и безопасного прибора в домашних условиях. Но это не является поводом не контролировать концентрацию ЛПНП, если того требует диагноз.

Когда требуются точные показатели, то лучше всего будет обратиться в медицинское учреждение и сдать кровь для проведения развернутого биохимического исследования в условиях лаборатории.

Источник: https://sosudportal.ru/ukol/nabor-dlya-opredeleniya-obshhego-xolesterina-v-krovi.html

Определение концентрации общего холестерола в сыворотке крови ферментативным методом

Принцип метода: Эфиры холестерола под действием фермента холестеролэстеразы распадаются на холестерол и жирные кислоты. Холестерол окисляется холестеролоксидазой с образованием перекиси водорода. Пероксид водорода реагирует с хромогеном с образованием окрашенного вещества (хинонимин):

Эстераза Эфиры холестерола —————-> Холестерол + Жирные кислоты
Оксидаза Холестерол + О2 —————-> Холест-4-ен-3-он + Н2О2
Пероксидаза 2Н2О2 + ГБА + 4-Амноантипирин ————————> Хинонимин + 4Н2О

Интенсивность окраски раствора при длине волны 550 нм прямо пропорциональна концентрации холестерола в нем.

Линейность метода: до 19,4 ммоль/л.

Норма:

Сыворотка крови – < 5,2 ммоль/л (37°С).

Оборудование и реагенты:

1) Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 550 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37°С;

2) Секундомер;

3) Автоматические пипетки на 10 мкл и 1000 мкл;

4) Сыворотка крови;

5) Реагент (холестеролэстераза, холестеролоксидаза ³ 50 Е/л, пероксидаза ³ 1000 Е/л, 4-аминоантипирин 0,3 ммоль/л);

6) Стандарт (Холестерол 5,2 ммоль/л);

7) Дистиллированная вода.

Проведение анализа

Добавить в кювету Опытная проба Холостая проба Стандартная проба
1. Сыворотка 10 мкл
2. Стандарт 10 мкл
3. Дистиллиро-ванная вода 10 мкл
4. Реагент 1 мл 1 мл 1 мл

Перемешать содержимое каждой пробирки. Инкубировать 10 мин при температуре 37°С. Измерить оптическую плотность опытной и стандартной проб против холостой пробы при длине волны 550 нм (DА). Окраска стабильна в течение 30 минут.

Расчет

Расчет по стандарту концентрации холестерола в сыворотке проводят по формуле:

DАоп С (ммоль/л) = ———— ´ Сст, DАст

где DАоп / ст – оптическая плотность опытной пробы и стандартной,

соответственно;

Сст – концентрация стандарта (ммоль/л).

Если концентрация холестерола превышает 19,4 ммоль/л (точка вне зоны линейности калибровочного графика), анализируемый образец (сыворотка или моча) следует развести 1:1 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат расчета умножить на 2.

Клинико-диагностическое значение: Уровни холестерола важны в диагностике и классификации гиперлипопротеинемий.

Концентрация холестерина в сыворотке указывает на работу печени, билиарного тракта, всасывание в кишечнике.

Высокие концентрации холестерина говорят об угрозе ишемической болезни сердца, о нарушении тиреоидной функции и заболеваниях надпочечников.

Лабораторная работа № 10.

Определение концентрации холестерина ЛПВП в сыворотке крови

Принцип метода: Холестерол липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) определяют после осаждения из сыворотки липопротеинов низкой и очень низкой плотности (ЛПНП и ЛПОНП, соответственно). Супернатант содержит холестерол, связанный с ЛПВП в растворенной форме и определяется ферментативным методом для определения концентрации общего холестерола.

Интенсивность окраски раствора при длине волны 550 нм прямо пропорциональна концентрации холестерола в ЛПВП.

Линейность метода: до 19,4 ммоль/л.

Норма:

Сыворотка крови – > 0,9 ммоль/л (37°С).

Оборудование и реагенты:

1) Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 550 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37°С;

2) Секундомер;

3) Автоматические пипетки на 10 мкл, 400 мкл , 2 мл и 1000 мкл;

4) Сыворотка крови;

5) Осаждающий реагент (хлорид магния, 100 ммоль/л в ортофосфорной кислоте, 30,3 ммоль/л)

6) Реагент (холестеролэстераза, холестеролоксидаза ³ 50 Е/л, пероксидаза ³ 1000 Е/л, 4-аминоантипирин 0,3 ммоль/л);

7) Стандарт (Холестерол 1,2 ммоль/л);

8) Дистиллированная вода.

Проведение анализа

В пластиковую пробирку внести 400 мкл сыворотки и добавить 2 мл осаждающего реагента. Тщательно перемешать в течение 15 секунд. После чего центрифугировать 3000 об/мин в течение 5 минут. Отобрать 1мл супернатанта в чистую пробирку и использовать для последующего определения холестерола в ЛПВП.

Добавить в кювету Опытная проба Холостая проба Стандартная проба
1. Супернатант 10 мкл
2. Стандарт 10 мкл
3. Дистиллиро-ванная вода 10 мкл
4. Реагент 1 мл 1 мл 1 мл

Перемешать содержимое каждой пробирки. Инкубировать 10 мин при температуре 37°С. Измерить оптическую плотность опытной и стандартной проб против холостой пробы при длине волны 550 нм (DА). Окраска стабильна в течение 30 минут.

Расчет

Расчет по стандарту концентрации холестерола в сыворотке проводят по формуле:

DАоп С (ммоль/л) = ———— ´ Сст, DАст

где DАоп / ст – оптическая плотность опытной пробы и стандартной,

соответственно;

Сст – концентрация стандарта (ммоль/л).

Общий холестерол сыворотки
Норма Пограничные значения Высокий уровень
< 5,2 ммоль/л 5,2-6,1 ммоль/л > 6,2 ммоль/л
Холестерол ЛПВП
Норма Пограничные значения Низкий уровень
> 0,9 ммоль/л > 0,9 ммоль/л; < 0,9 ммоль/л < 0,9 ммоль/л

Клинико-диагностическое значение: Содержание холестерола в ЛПВП в кови здоровых людей мало меняется с возрастом и не подвержено колебаниям.

Величины содержания холестерола в ЛПВП < 0,9 ммоль/л свидетельствуют о нарушении липидного обмена и угрозе атеросклероза. Повышение содержания холестерола в ЛПВП, как и повышение содержания общего холестерина в результате увеличения этой фракции, является доброкачественным состоянием.

ТЕМА 7. БЕЛКОВЫЙ ОБМЕН

Лабораторная работа № 11.



Источник: https://infopedia.su/14×17298.html

Ссылка на основную публикацию